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胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

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林虹君, 卫军营, 贾伟, 张养军, 钱小红, 蔡耘. 2010: 胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究, 质谱学报, 31(5): 283-290.
引用本文: 林虹君, 卫军营, 贾伟, 张养军, 钱小红, 蔡耘. 2010: 胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究, 质谱学报, 31(5): 283-290.
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LIN Hong-jun, WEI Jun-ying, JIA Wei, ZHANG Yang-jun, QIAN Xiao-hong, CAI Yun. 2010: Improved Method for Protein Quantification by Using Rare Earth Metal-Chelated Tags after Guanidiation, Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 31(5): 283-290.
Citation: LIN Hong-jun, WEI Jun-ying, JIA Wei, ZHANG Yang-jun, QIAN Xiao-hong, CAI Yun. 2010: Improved Method for Protein Quantification by Using Rare Earth Metal-Chelated Tags after Guanidiation, Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 31(5): 283-290.
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胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

  • 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京蛋白质组研究中心,蛋白质组学国家重点实验室,北京,102206

  • 北京理工大学生命学院,北京,100081

Improved Method for Protein Quantification by Using Rare Earth Metal-Chelated Tags after Guanidiation

  • 摘要: 稀土金属元素标记技术利用双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐(DTPA双酸酐)将稀土金属元素和目标肽段连接起来作为质量标签,结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析实现蛋白质的相对定量研究.为进一步提高标记效率,本研究对反应体系温度、pH值、反应时间和金属标签过量倍数等进行优化,并结合胍基化修饰技术封闭蛋白质酶切肽段中的侧链ε-氨基,使标记反应只发生在末端氨基,提高标记选择性.标准蛋白质实验结果表明,所有酶切肽段胍基化反应效率均大于95%,且胍基化修饰反应对金属标记效率没有影响.对于选定的7个标准蛋白质而言,每个蛋白质都至少有3个肽段可以得到良好的标记结果.对于离子抑制效应带来的干扰,可通过标准曲线进行校正,结果表明,当两种金属离子浓度比小于6时,该效应对蛋白质相对定量没有影响.胍基化修饰结合稀土金属标记方法不仅能在肽段水平实现相对定量,而且能在蛋白质水平实现相对定量.
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出版历程
  • 刊出日期:  2010-10-28

胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

  • 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京蛋白质组研究中心,蛋白质组学国家重点实验室,北京,102206
  • 北京理工大学生命学院,北京,100081

摘要: 稀土金属元素标记技术利用双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐(DTPA双酸酐)将稀土金属元素和目标肽段连接起来作为质量标签,结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析实现蛋白质的相对定量研究.为进一步提高标记效率,本研究对反应体系温度、pH值、反应时间和金属标签过量倍数等进行优化,并结合胍基化修饰技术封闭蛋白质酶切肽段中的侧链ε-氨基,使标记反应只发生在末端氨基,提高标记选择性.标准蛋白质实验结果表明,所有酶切肽段胍基化反应效率均大于95%,且胍基化修饰反应对金属标记效率没有影响.对于选定的7个标准蛋白质而言,每个蛋白质都至少有3个肽段可以得到良好的标记结果.对于离子抑制效应带来的干扰,可通过标准曲线进行校正,结果表明,当两种金属离子浓度比小于6时,该效应对蛋白质相对定量没有影响.胍基化修饰结合稀土金属标记方法不仅能在肽段水平实现相对定量,而且能在蛋白质水平实现相对定量.

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